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拉曼光譜的技術(shù)分析
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發(fā)布時(shí)間:2013/2/2 15:57:59 閱讀:18089

拉曼光譜的技術(shù)分析

 

    拉曼散射的光譜。1928C.V.拉曼實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)光穿過透明介質(zhì)被分子散射的光發(fā)生頻率變化,這一現(xiàn)象稱為拉曼散射,同年稍后在蘇聯(lián)和法國也被觀察到。在透明介質(zhì)的散射光譜中,頻率與入射光頻率υ0相同的成分稱為瑞利散射;頻率對(duì)稱分布在υ0兩側(cè)的譜線或譜帶υ0±υ1即為拉曼光譜,其中頻率較小的成分υ0υ1又稱為斯托克斯線,頻率較大的成分υ0υ1又稱為反斯托克斯線?拷鹄⑸渚兩側(cè)的譜線稱為小拉曼光譜;遠(yuǎn)離瑞利線的兩側(cè)出現(xiàn)的譜線稱為大拉曼光譜。瑞利散射線的強(qiáng)度只有入射光強(qiáng)度的10-3,拉曼光譜強(qiáng)度大約只有瑞利線的10-3。小拉曼光譜與分子的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)有關(guān), 大拉曼光譜與分子振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)有關(guān)。拉曼光譜的理論解釋是,入射光子與分子發(fā)生非彈性散射,分子吸收頻率為υ0的光子,發(fā)射υ0υ1的光子,同時(shí)分子從低能態(tài)躍遷到高能態(tài)(斯托克斯線);分子吸收頻率為υ0的光子,發(fā)射υ0υ1的光子,同時(shí)分子從高能態(tài)躍遷到低能態(tài)(反斯托克斯線 )。分子能級(jí)的躍遷僅涉及轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí),發(fā)射的是小拉曼光譜;涉及到振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí),發(fā)射的是大拉曼光譜。與分子紅外光譜不同,極性分子和非極性分子都能產(chǎn)生拉曼光譜。激光器的問世,提供了優(yōu)質(zhì)高強(qiáng)度單色光,有力推動(dòng)了拉曼散射的研究及其應(yīng)用。拉曼光譜的應(yīng)用范圍遍及化學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)和醫(yī)學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域,對(duì)于純定性分析、高度定量分析和測定分子結(jié)構(gòu)都有很大價(jià)值。

  (一)含義

  光照射到物質(zhì)上發(fā)生彈性散射和非彈性散射. 彈性散射的散射光是與激發(fā)光波長相同的成分.非彈性散射的散射光有比激發(fā)光波長長的和短的成分, 統(tǒng)稱為拉曼效應(yīng)

  當(dāng)用波長比試樣粒徑小得多的單色光照射氣體、液體或透明試樣時(shí),大部分的光會(huì)按原來的方向透射,而一小部分則按不同的角度散射開來,產(chǎn)生散射光。在垂直方向觀察時(shí),除了與原入射光有相同頻率的瑞利散射外,還有一系列對(duì)稱分布著若干條很弱的與入射光頻率發(fā)生位移的拉曼譜線,這種現(xiàn)象稱為拉曼效應(yīng)。由于拉曼譜線的數(shù)目,位移的大小,譜線的長度直接與試樣分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)有關(guān)。因此,與紅外吸收光譜類似,對(duì)拉曼光譜的研究,也可以得到有關(guān)分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)的信息。目前拉曼光譜分析技術(shù)已廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的鑒定,分子結(jié)構(gòu)的研究譜線特征

  (二)拉曼散射光譜具有以下明顯的特征:

  a.拉曼散射譜線的波數(shù)雖然隨入射光的波數(shù)而不同,但對(duì)同一樣品,同一拉曼譜線的位移與入射光的波長無關(guān),只和樣品的振動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)有關(guān);

  b. 在以波數(shù)為變量的拉曼光譜圖上,斯托克斯線和反斯托克斯線對(duì)稱地分布在瑞利散射線兩側(cè), 這是由于在上述兩種情況下分別相應(yīng)于得到或失去了一個(gè)振動(dòng)量子的能量。

  c. 一般情況下,斯托克斯線比反斯托克斯線的強(qiáng)度大。這是由于Boltzmann分布,處于振動(dòng)基態(tài)上的粒子數(shù)遠(yuǎn)大于處于振動(dòng)激發(fā)態(tài)上的粒子數(shù)。

  (三)拉曼光譜技術(shù)的優(yōu)越性

  提供快速、簡單、可重復(fù)、且更重要的是無損傷的定性定量分析,它無需樣品準(zhǔn)備,樣品可直接通過光纖探頭或者通過玻璃、石英、和光纖測量。此外

  1 由于水的拉曼散射很微弱,拉曼光譜是研究水溶液中的生物樣品和化學(xué)化合物的理想工具。

  2 拉曼一次可以同時(shí)覆蓋50-4000波數(shù)的區(qū)間,可對(duì)有機(jī)物及無機(jī)物進(jìn)行分析。相反,若讓紅外光譜覆蓋相同的區(qū)間則必須改變光柵、光束分離器、濾波器和檢測器

  3 拉曼光譜譜峰清晰尖銳,更適合定量研究、數(shù)據(jù)庫搜索、以及運(yùn)用差異分析進(jìn)行定性研究。在化學(xué)結(jié)構(gòu)分析中,獨(dú)立的拉曼區(qū)間的強(qiáng)度可以和功能集團(tuán)的數(shù)量相關(guān)。

  4 因?yàn)榧す馐闹睆皆谒木劢共课煌ǔV挥?/SPAN>0.2-2毫米,常規(guī)拉曼光譜只需要少量的樣品就可以得到。這是拉曼光譜相對(duì)常規(guī)紅外光譜一個(gè)很大的優(yōu)勢。而且,拉曼顯微鏡物鏡可將激光束進(jìn)一步聚焦至20微米甚至更小,可分析更小面積的樣品。

  5 共振拉曼效應(yīng)可以用來有選擇性地增強(qiáng)大生物分子特個(gè)發(fā)色基團(tuán)的振動(dòng),這些發(fā)色基團(tuán)的拉曼光強(qiáng)能被選擇性地增強(qiáng)100010000倍。

  (四)幾種重要的拉曼光譜分析技術(shù)

  1、單道檢測的拉曼光譜分析技術(shù)

  2、以CCD為代表的多通道探測器用于拉曼光譜的檢測儀的分析技術(shù)

  3、采用傅立葉變換技術(shù)的FT-Raman光譜分析技術(shù)

  4、共振拉曼光譜分析技術(shù)

  5、表面增強(qiáng)拉曼效應(yīng)分析技術(shù)

  (五)拉曼信號(hào)的選擇

  入射激光的功率,樣品池厚度和光學(xué)系統(tǒng)的參數(shù)也對(duì)拉曼信號(hào)強(qiáng)度有很大的影響,故多選用能產(chǎn)生較強(qiáng)拉曼信號(hào)并且其拉曼峰不與待測拉曼峰重疊的基質(zhì)或外加物質(zhì)的分子作內(nèi)標(biāo)加以校正。其內(nèi)標(biāo)的選擇原則和定量分析方法與其他光譜分析方法基本相同。

  斯托克斯線能量減少,波長變長

  反斯托克斯線能量增加,波長變短

  (六)拉曼光譜的應(yīng)用方向

  拉曼光譜分析技術(shù)是以拉曼效應(yīng)為基礎(chǔ)建立起來的分子結(jié)構(gòu)表征技術(shù),其信號(hào)來源與分子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)。拉曼光譜的分析方向有:

  定性分析:不同的物質(zhì)具有不同的特征光譜,因此可以通過光譜進(jìn)行定性分析。

  結(jié)構(gòu)分析:對(duì)光譜譜帶的分析,又是進(jìn)行物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)。

  定量分析:根據(jù)物質(zhì)對(duì)光譜的吸光度的特點(diǎn),可以對(duì)物質(zhì)的量有很好的分析能力。

  (七)拉曼光譜用于分析的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)

  1、拉曼光譜用于分析的優(yōu)點(diǎn)

  拉曼光譜的分析方法不需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理,也沒有樣品的制備過程,避免了一些誤差的產(chǎn)生,并且在分析過程中操作簡便,測定時(shí)間短,靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)

  2、拉曼光譜用于分析的不足

  (1)拉曼散射面積

  (2)不同振動(dòng)峰重疊和拉曼散射強(qiáng)度容易受光學(xué)系統(tǒng)參數(shù)等因素的影響

  (3)熒光現(xiàn)象對(duì)傅立葉變換拉曼光譜分析的干擾

  (4)在進(jìn)行傅立葉變換光譜分析時(shí),常出現(xiàn)曲線的非線性的問題

  (5)任何一物質(zhì)的引入都會(huì)對(duì)被測體體系帶來某種程度的污染,這等于引入了一些誤差的可能性,會(huì)對(duì)分析的結(jié)果產(chǎn)生一定的影響

 

 
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